Флуометрический анализ

Глава II Применение флуориметрического анализа к некоторым лекарственным веществам

2.1 Определение содержания рибофлавина (витамина В2) методом флуориметрии

Метод основан на сравнение интенсивности флуоресценции стандартного и анализируемого растворов витамина В1 при облучении светом ультрафиолетового диапазона. Содержание витамина В1 определяют, не прибегая к построению градуировочного графика лишь по одной точке, стандартный раствор при этом готовят с содержанием рибофлавина, близким к определяемому содержанию и не превышающим 1. 10-5 моль/дм3.

Необходимыми реактивами являются рабочий стандартный раствор и анализируемый раствор.

Для приготовления рабочего стандартного раствора, содержащего 0,04 мг/см3 рибофлавина, взвешивают 0,0400 г рибофлавина в стаканчике или в фарфоровой чашке (навеску пересчитывают на чистую субстанцию). Затем навеску растворяют в горячей воде и переносят в мерную колбу объемом 1 дм3  на водяной бане. После охлаждения объем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор годен в течение 1 месяца при условии его хранения в бутылке из темного стекла в холодильнике при температуре от 5 до 10 0С. В день проведения испытаний часть основного раствора переносят в стаканчик и выдерживают в темном месте до приобретения комнатной температуры, затем отбирают пипеткой 10 см3 раствора в мерную колбу объемом 100 см3 и доводят объем раствора до метки (1 см3 раствора содержит 0,0004 мг/см3  рибофлавина). Раствор годен только в день приготовления, а между измерениями хранится в темном месте.

В качестве анализируемого раствора используют или готовый раствор рибофлавина, или его готовят следующим образом: навеску растертых в ступке драже массой около 1 г взвешивают с точностью до 0,0002 г, растворяют в горячей дистиллированной воде при подогревании на водяной бане и количественно переносят в мерную колбу объемом 500 см3. Затем раствор охлаждают, доводят объем до метки и фильтруют через обычную фильтровальную бумагу (первые 10 см3 отбрасывают). Из полученного раствора готовят раствор второго разведения. Для этого отбирают 10 см3 раствора в мерную колбу на 100 см3 и доводят до метки дистиллированной водой. Расчетное содержание рибофлавина в растворе около 0,4 мкг/см3 или 0,0004 мг/см3. Между замерами раствор хранится в темном месте. [10, 29]

 

2.2 Флуориметрическое определение содержания родамина

Родаминовые красители (родамины) относятся к группе полярных ксантеновых красителей. Они обладают яркой флуоресценцией в жидких растворах (вода, спирт), что объясняется наличием у родаминов кислородных мостиков, придающих их молекулам необходимую «жесткость», а следовательно, и способность к флуоресценции. Родамины интенсивно поглощают в видимой и менее интенсивно в ультрафиолетовой части спектра. Поэтому для возбуждения их флуоресценции можно применять как видимый, так и ультрафиолетовый свет. [23]

 Эти соединения характеризуются  молекулярным типом свечения, спектры поглощения и флуоресценции зеркально симметричны.

Необходимыми реактивами являются стандартные растворы родамина, содержащие 1,0*10-5; 1,0*10-6 и 1,0*10-7 г/см3 родамина.

Согласно правилу зеркальной симметрии (см. рисунок 2) флюоресценцию родамина необходимо измерять при длине волны возбуждения 520 нм и длине волны флюоресценции 580 нм.

 В зависимости от концентрации  исследуемого раствора готовят  одну из серий эталонных растворов родамина:

 первая серия (мкг): 1,0; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0;

 вторая серия (мкг): 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0.

 Для этого в ряд мерных  колб вместимостью 25 см3 вводят соответствующие объемы стандартных растворов родамина (1,0*10-6 или 1,0* 10-7 г/см3) и разбавляют дистиллированной водой до метки.

В кювету флуориметра «Квант» наливают 10 см3 стандартного раствора родамина и измеряют флуоресценцию. Затем стандартный раствор выливают, кювету ополаскивают несколько раз дистиллированной водой и 2–3 раза анализируемым раствором, заполняют кювету анализируемым раствором и измеряют флюоресценцию. Измерение интенсивности флуоресценции проводится по отношению к воде.

 По полученным данным строят  градуировочный график, откладывая  по оси абсцисс содержание  С родамина (мкг), по оси ординат  – интенсивность флуоресценции If.

 Исследуемый раствор (контрольная задача) разбавляют водой до метки в мерной колбе вместимостью 25 см3, перемешивают и измеряют интенсивность флуоресценции. Содержание родамина в исследуемом растворе определяют по градуировочному графику.

 

2.3 Флуориметрическое определение кверцетина в лекарственных формах рутина

Точную навеску 0,1 г. препарата или мелкоизмельченных таблеток переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл ДМФА, энергично встряхивают 1 мин. Затем прибавляют ДМФА до метки (раствор А). К 1 мл раствора А прибавляют 8 мл ДМФА, 1 мл 1 % раствора ацетата цинка в ДМФА, перемешивают и флуориметрируют относительно стандартного раствора кверцетина, для чего в ряд пробирок прибавляют 0,1; 0,3; 0,5; 0,8 и 1 мл стандартного раствора кверцетина в ДМФА с содержанием 100 мкг/мл, по 1 мл 1% раствора ацетата цинка в ДМФА, прибавляют ДМФА до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют с максимумом возбуждения при 472 нм и излучении при 522 нм одновременно с испытуемыми растворами.

Расчет содержания кверцетина проводят по калибровочному графику. [37]

 

2.4 Флуориметрическое определение 2-амино-4-окси-6- птеридинкарбоновой кислоты в лекарственных формах фолиевой кислоты

0,1 г (точная навеска) препарата  или мелкоизмельченных таблеток  переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл хлороформа и встряхивают 2 мин. Затем прибавляют хлороформа до метки. К 1 мл данного раствора прибавляют 8 мл ДМФА, 1 мл 0,1% раствора ацетата цинка в ДМФА, перемешивают и флуориметрируют при возбуждении флуоресценции 370 нм и излучении 420 нм относительно стандартного раствора 2-амино-4-окси-б-птеридинкарбоновой кислоты. Для чего в ряд пробирок прибавляют 0,1; 0,3; 0,5; 0,8 и 1 мл стандартного раствора 2-амино-4-окси-6-птеридинкарбоновой кислоты в ДМФА с содержанием 20 мкг/мл, по 1 мл 0,1%) раствора ацетата цинка в ДМФА, прибавляют ДМФА до 10 мл, перемешивают и флуориметрируют при 380/420 нм одновременно с испытуемыми растворами. [37]

 

Заключение

За последние годы практическая медицина обогатилась большим количеством новых эффективных лекарственных средств. Увеличение арсенала лекарственных препаратов сопровождается одновременным развитием новых методов их качественного и количественного анализа. Методы, эффективность которых всеми признана, вносятся в Государственную Фармакопею и становятся официальными. Одним из таких методов является флуориметрия (люминесцентный анализ). [19]

Практически все органические соединения способны не только избирательно поглощать, но и излучать полученную энергию. Флуориметрия, как наиболее простой из эмиссионных методов используется незаслуженно ограниченно. Далеко не все лекарственные соединения обладают собственной флуоресценцией в видимой области спектра, на наблюдении которой чаще всего и основываются методики. Как и фотометрический анализ, флуориметрия должна быть иметь набор реакций групповых и специфичных, методики обнаружения и количественного определения в различных объектах. Поэтому, в целях развития и совершенствования метода, необходим поиск химических реакций, приводящих к образованию флуоресцирующих в видимой области производных.

Метод люминесцентного анализа, характеризуется исключительно высокой чувствительностью, дает возможность определить сотые, тысячные и десятитысячные доли микрограмма вещества. [33]

 

Список используемой литературы:

1. Алексковский В.В. Бардин Н.В. Физико-химические методы анализа - Л.: Химия, 1971.-424 с.

2. Бабилев В.Ф. Применение люминесценции в фармацевтическом анализе. - Кишинев: "Штиинца", 1977. - 120 с.

3. Бабко А.К. и др. Физико - химические методы анализа - М.: Высшая школа, 1968, 335 с.

4. Барковский В.Ф., Городенцева Т.Б., Топорова Н.Б. Основы физико- химических методов анализа. - М-: Высшая школа, 1983. - С. 60-66.

5. Божевольнов Е.А. Люминесцентный анализ неорганических веществ - М.: Химия, 1966. - 416 с.

6. Будко Е.В. Флуоресценцтный анализ лекарственных соединений, содержащих фенольныый гидроксил: Дис....д - ра.фармац.наук. - Курск, 2001.- 321 с.

7. Головина А.П., Левшин Л.В. Химический люминесцентный анализ неорганических веществ. - М * Химия 1978 -245 с.

8. Государственная фармакопея СССР / МЗ СССР. - 11-е ИЗД., доп. - М.: Медицина, 1987. - Вып.1.: Общие методы анализа - 333 с.

9. Государственная фармакопея СССР / МЗ СССР. - 11-е ИЗД., доп. - М.: Медицина, 1988. - Вып.2.: Общие методы анализа - 398 с.

10. Григорьев О.А., Иванов В.М., Хабаров А.А., Махоткина Т.М. Флуоресцентный метод в спектрохимическом анализе органических веществ// Материалы 6-ой Всесоюз. конф. по аналитической химии органических веществ. - М 1991 -С.55.

11. Давиденко Т.Д. Определение подлинности лекарственных веществ с использованием флуоресценции.// Современные проблемы фармации: Тез. респуб. науч. конф. - Алма -Ата. 1989. - С.28-30.

12. Инструментальные методы анализа функциональных групп органических соединений / Под ред. С. Сиггиа. - М.: Мир, 1974. - 464 с.

13. Кемертелидзе Э.П., Георгиевский В.Г. Физико-химические методы анализа некоторых биологически активных веществ растительного происхождения. - Минциереба. - 976. - 222с.

14. Коренман И.М. Методы количественного химического анализа. - М.: Химия, 1978. - С.68.

15. Коренман И.М. Методы определения органических соединений. - М.: Химия, 1975. - С.221 -223.

16. Коренман И.М. Фотометрический анализ: методы определения органических соединений. - М.: Химия, 1975. - 360 с.

17. Лакович Д. Основы флуоресцентной спектроскопии - М.: Мир, 1986. - 496 с.

18. Лобанов В.И., Бабилев Ф.В. Применение люминесценции в фармацевтическом анализе.//Фармация. - 1977. - №5. -С. 12.

19. Люминесцентный анализ / Под ред. М.А.Константиновой - Шлезенгер М.: Химия, 1961. - 348 с.

20. Мазор Л.Методы органического анализа - М.: Мир, 1986. - 584с.

21. Матье Ж, Панико Р. Курс теоретических основ органической химии. - М.: Мир, 1975. - С.541.

22. Михайлов В.Г. Люминесцентный анализ в медицине. Ташкент: МЗ УзССР, 1963. - С.35-47.

23. Нейланд О.Я. Органическая химия - М.: Высш.шк., 1990. - 751 с.

24. Новиков Д.А. Теоретическое обоснование и оптимизация флуориметрического определения в фармацевтичсеском и биофармацевтическом анализе: Дис. д - ра. фармац.наук. - Пермь, 1998. – 308 с.

25. Новиков 0.0., Новиков Д.А., Хабаров А.А., Татаринова М.В. Применение плоского оптического зеркала в целях оптимизации флуориметрическихизмерений./Достижениесовременной фармацевтической науки и практики на рубеже XXI века: Тез. науч. трудов, конф. поев. 30-летию фармац фак КГМУ. - Курск. 1997. - С. 100-101.

26. Новиков Д.А., Новиков 0.0., Хабаров А.А. Дополнительный детектор для флуориметрии. // Актуальные вопросы медицины и фармации: Тез. науч. конф. - Курск. 1996. - С. 130.

27. Новиков Д.А., Новиков 0.0., Хабаров А.А. Способ дополнительного детектирования в флуоресцентном анализе. // Актуальные проблемы медицины и фармации: Тез. науч. конф. - Курск. 1997. - С. 183.

28. Новиков Д.А., Новиков 0.0., Хабаров А.А., Татаренкова В.М. Оптимизация флуориметрических измерений. // Актуальные вопросы медицины и фармации: Тез. науч. конф. - Курск. 1996. - С. 129.

29. Новиков Д.А., Хабаров А.А. Бесстандартный метод определения в флуоресцентном анализе. / Методические рекомендации. - Курский госмедуниверситет. - 1997. - 9 с.

30. Новиков Д.А., Хабаров А.А. Способ преодоления порога концентрационного тушения в фармацевтическом анализе./ Методические рекомендации. - Курский госмедуниверситет. -1997.- 10 с.

31. Нурмухаметов Р.Н. Поглощение и люминесценция ароматических соединений - М.: Химия, 1971, - 458 с.

32. Оверлингас В.Ю., Григорьев О.А., Иванов В.М. Флуориметрическое

определение некоторых лекарственных веществ на основе окислительно-восстановительных реакций // Мат. Всерос. науч.- прак. конференции молодых ученых, посвященной 70-летию декрета о национализации аптек. -Куйбышев, 1988. - С. 131-132.

33. Основные методы исследования лекарственных средств: фармацевтических препаратов, лекарственного растительного сырья и лекарственных форм. - Женева: ВОЗ. -1999. -127 с.

34. Роберте Дж., Касерно М. Основы органической химии: В 2 т. - М.: Мир, 1978. - Т.1. - 1978. - 357 с. - Т.2. - 1978. - 403 с.

35. Свойства органических соединений. Справочник. / Под ред. А.А.Потехина. - Л.: Химия, 1984. - 520 с.

36. Физико - химические методы анализа./ Под редакцией В.Б.Алесковского. -Л.: Химия, 1988. - С.23-36.

37. Хабаров А.А. Идентификация некоторых фармацевтических препаратов флуоресцентным методом. // Материалы 2-го Всесоюзного съезда фармацевтов. - Саратов. 1989. - С. 156-157.