Апирогенность как одно из основных требований к качеству парентеральных лекарственных форм. Пирогенные вещества. Способы депирогенизаци

       Сборник-уравнитель (25) также предназначен  для смешивания воды с химическими  реагентами, добавляемыми в камеру испарения для получения качественной апирогенной воды, отвечающей требованиям фармакопеи. Для этой цели в сборнике-уравнителе имеется специальная трубка, через которую химические реагенты поступают в камеру испарения (10) вместе с водой. Строгая дозировка химических реагентов обеспечивается специальным дозирующим устройством, состоящим из двух стеклянных сосудов (22) с капельницами (24), двух фильтров (21) и двух дозаторов (18), соединенных резиновыми трубками.

       Дозирующее устройство соединено со сборником-уравнителем (25) через капельницы (24). Крепление дозирующего устройства осуществляется на кронштейне (19), в котором имеются специальные отверстия для стеклянных сосудов (22), закрепляемых при помощи резиновых колец (20), и специальные пазы, в которые свободно вставлены дозаторы (18). Дозаторы (18) крепятся на кронштейне (19) контргайками (17). Таким образом, получение воды апирогенной обеспечивается за счет тщательной сепарации пара, а также за счет добавления в воду по необходимости химических реагентов: калия перманганата, квасцов алюмокалиевых и натрия гидрофосфата, для чего имеется специальное дозирующее устройство, состоящее из двух стеклянных сосудов с капельницами, фильтрами и дозаторами. В один сосуд помещают раствор натрия гидрофосфата и квасцов алюмокалиевых, в другой – раствор калия перманганата. Дозирующее устройство устанавливают так, чтобы на один литр воды подавалось 0,152 г калия перманганата, 0,228 г квасцов алюмокалиевых и 0,228 г натрия гидрофосфата. Однако, вода до дистилляции не освобождается от солей, придающих ей жесткость.

       Аппарат А-10 работает с производительностью  (10 л/ч), но является технически  более совершенной моделью. Получение  воды апирогенной в нем обеспечивается  за счет тщательной сепарации пара, проходящего через отражательные экраны сепаратора, расположенные в верхней части камеры испарения, а также за счет добавления в воду необходимых химических реагентов. Аппарат снабжен датчиком уровня воды, предотвращающим перегорание электронагревателей путем автоматического их отключения от электросети, если уровень воды в камере испарения будет ниже допустимого.

       В настоящее время выпускают  три типа дистилляторов (АЭВС-4, АЭВС-25, АЭВС-60). Они отличаются друг  от друга производительностью, габаритами и потреблением электроэнергии.

       Аппарат АЭВС-4А (дистиллятор электрический  с водоподготовкой для получения  воды апирогенной) представляет  собой стационарную установку,  состоящую из следующих составных  частей: испарителя, сборника воды для инъекций, трубопроводов, электрошкафа и противонакипного магнитного устройства (ПМУ).

       Работа аппарата осуществляется  следующим образом: на линии  подачи водопроводной воды находится  противонакипное магнитное устройство  для освобождения исходной (водопроводной) воды от солей и различных примесей, затем вода попадает в охлажденную рубашку сборника и испаритель. После достижения заданного уровня излишки воды сбрасываются в канализацию. Образующийся в камере испарения пар проходит через сепаратор и затем по трубопроводу поступает в сборник, в котором благодаря водяной охлаждающей рубашке пар охлаждается и конденсируется. После заполнения сборника водой электронагреватель в камере испарения отключается. Производительность аппарата – 4 л/ч.

       АЭВС-25 (дистиллятор электрический с водоподготовкой для получения апирогенной воды) представляет собой стационарную установку. Аппарат состоит из следующих составных частей: испарителей и 2 ступеней (2), конденсатора (1), сборника воды для инъекций (3) «рис. 3».

       На линии подачи водопроводной  воды в испарителе вмонтировано  противонакипное магнитное устройство, предназначенное для предварительной  очистки исходной воды. Одновременно  с подачей воды в испаритель  по специальному трубопроводу  водопроводная вода подается в охлаждающую рубашку сборника. Образующийся в испарителе 1 ступени пар проходит через сепаратор и затем по трубопроводу поступает в нагревательную камеру испарителя 2 ступени.

       Пароводная смесь из нагревательной  камеры и пар, прошедший через сепаратор испарителя 2 ступени, поступают по трубопроводам в сборник. В сборнике благодаря его водяной охлаждающей рубашке проходит конденсация пароводяной смеси и собирается вода для инъекций.

 

«Рис. 3» Аппарат  для получения воды апирогенной  АЭВС-25

 

       Аппарат АЭВС-60 представляет собой  аквадистиллятор с водоподготовкой  для получения воды апирогенной  стационарного типа (производительность 60 л/ч). Принцип работы его тот  же, что и у аппарата АЭВС-25.

       Вода деминерализованная (Aqua demineralisata) в медицинской практике применяется наряду с водой для инъекций, для изготовления инъекционных растворов. Вода деминерализованная для инъекционных растворов получается путем пропускания исходной воды через стерилизующий фильтр и свежерегенерированные иониты: пористые сильнокислотные катиониты и высокоосновные аниониты в Н- и ОН-формах, так как они после тщательной отмывки не выделяют в воду никаких примесей. В качестве катионита используют КУ-23 или его аналог КУ-2-8пч, в качестве анионита АВ-171 или АВ-17-8пс. Ионообменные смолы перед употреблением и периодически по мере истощения обменной емкости подвергают регенерации. В качестве стерилизующего фильтра используют фильтр Сальникова ( «СФ-5»). Можно использовать и другие, гарантирующие стерильность пропущенной через них воды фильтры: пористые стеклянные, фарфоровые, керамические, миллипоровые.

       В процессе получения воды  осуществляют постоянное наблюдение  за показаниями кондуктомера  для определения электросопротивления воды, т. е. осуществляют контроль за глубиной обессоливания воды.

       Воду деминерализованную для  инъекционных растворов контролируют  в соответствии со статьями  ГФ ХI «Вода дистиллированная» и «Вода для инъекций». Срок хранения – не более 24 ч.

      

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Хранение  воды для инъекций

       Большое значение для качества  воды имеет способ ее сбора  и хранение.

       Хранить воду для инъекций  необходимо в закрытых сосудах,  защищенных от попадания углерода  диоксида и пыли. Сосуды необходимо часто мыть и стерилизовать.

       Для этой цели рекомендованы  сборники воды для инъекций, которые  предназначены для сбора, хранения  и стерилизации воды в аптеках  и стационарных лечебных учреждениях.  Вместимость сборников 40 л (СИ-40) и 100 л (СИ-100). Сборники воды для инъекций «рис. 4» сделаны из нержавеющей стали, снабжены трубчатыми электорнагревателями, фильтром воздуха, устройством для наблюдения за уровнем воды, питающим патрубком, сливным краном и температурным датчиком, отключающим электронагреватели при повышении температуры стенок сборника выше 100⁰ С. Сборники могут присоединяться к одному или нескольким аппаратам для получения воды для инъекций, работающим одновременно.

       Для сохранения стерильности  воды апирогенной в ряде аптек осуществляют подачу ее от аквадистиллятора к рабочему месту ассистента по стерильному стеклянному трубопроводу. На пути следования по трубопроводу вода стерилизуется ультрафиолетовой радиацией. Хранение в сборниках воды для инъекций и подача ее на рабочее место ассистента осуществляется в соответствии с приказом Минздрава СССР № 581 от 30.04.85 г. Вода для инъекций применяется свежеперегнанной. Хранится в асептических условиях. Годна к употреблению не более 24 ч.

 

 

«Рис. 4» Сборник  воды для инъекций

 

       Контроль качества воды для  инъекций. На основании приказа  Минздрава СССР № 573 от 30.11.62 г.  вода для инъекций контролируется  ежедневно в соответствии со  статьями ГФ ХI «Вода дистиллированная» и «Вода для инъекций». СЭС два раза в квартал проверяет воду на стерильность и один раз в квартал на пирогенность.

 

 

 

 

 

 

 

 

Методы  определения пирогенных веществ  в лекарственных средствах

       В связи значительной сложности  предохранения лекарственных средств  от микробной контаминации и  большой опасности пирогенной реакции фармакопеями многих стран мира, в том числе СССР, предусмотрена проверка воды для инъекций и ряда лекарственных веществ на пирогенность.

       Проверке на пирогенность подвергают  растворы, вводимые внутривенно  в объемах 10 мл и более (ГФ XI). Обязательно должны проверяться 5% раствор глюкозы, изотонический натрия хлорид, 10% раствор желатина. Один раз в квартал (приказ Минздрава № 573 от 30. 11. 62 г.) проводят испытание на пирогенность воды для инъекций. Важно проверять также препараты, получаемые из природного сырья (антибиотики, ферменты, экстракты из печени, препараты крови, лизаты белков и т. п.). Требуют также проверки пирогенности вода и другие жидкости, используемые для промывания флаконов, ампул, приборов для инфузий, изделий из стекла, пластмассы и резины, в которых содержатся или с которыми соприкасаются препараты для вливания; шприцы одноразового использования; пластмассы и резины, применяемые при изготовлении растворов для инъекций.

 

Биологический метод (испытание на кроликах)

       Согласно ГФ XI испытание пирогенности проводят на кроликах (биологический метод). Берут кроликов обоего пола массой от 1,5 до 2,5 кг, содержащихся в строго регламентированных условиях и имеющих исходную ректальную температуру от 38,5⁰ С до 39,5⁰ С. Растворы испытуемых лекарственных веществ или препаратов и жидкие лекарственные препараты вводят в количествах и растворителях, указанных в соответствующих фармакопейных статьях или специальных инструкциях. Используемая для разведения вода для инъекций должна быть стерильной и апирогенной. Для испытания воды для инъекций из нее предварительно готовят 0,9%-ный раствор натрия хлорида, используя депирогенизированный и простерилизованный (нагреванием при 250⁰ С в течение 30 мин или при 180⁰ С в течение 2 ч) натрия хлорид. Количество вводимого раствора натрия хлорида составляет 10 мл на 1 кг массы.

       Стерильные испытуемые растворы, подогретые до 37⁰ С, вводят кроликам в ушную вену.

       Испытание каждого раствора проводят  на 3 кроликах, измеряя ректальную температуру 3 раза с промежутками 1 ч.

       Вода или раствор лекарственного  вещества считаются непирогенными,  если после введения ни у  одного из трех подопытных  кроликов ни при одном из  трех измерений не наблюдалось  повышение температуры более, чем на 0,6⁰ С по сравнению с исходной температурой, и в сумме повышение температуры у 3 кроликов не превышало 1,4⁰ С.Если эта сумма превышает 2,2⁰ С, воду для инъекций или исследуемый раствор лекарственного средства считают пирогенным. Когда сумма повышений температуры тела у трех кроликов находится в пределах от 1,5 до 2,2⁰ С, испытание повторяют дополнительно на пяти кроликах.

       Нормативными документами установлены  тест-дозы на апирогенность растворов:  для растворов натрия гидрокарбоната 1 мл/кг массы тела животного; глюкозы 5 и 10 % концентрации – 10 мл/кг (в виде 5 % раствора), 20 и 40 % концентрации – 10 мл/кг (в виде 10 % раствора); для солевых растворов: «Хлосоль», «Трисоль», «Квартасоль», «Квинтасоль», Рингера – Локка и других – 10 мл/кг массы тела животного.

       Рассмотренный метод имеет ряд  существенных недостатков: необходимость  содержать большое количество  подопытных животных, значительные  колебания чувствительности кроликов  к пирогенам, высокая стоимость  анализа. 

 

Лимулус-тест (LaL-тест)

       В настоящее время наиболее  перспективным методом испытания  на пирогенность можно считать  лимулус-тест (LaL-тест). Метод основан на способности лизированных клеток (амебоцитов) крови крабов Limulus poliphemus реагировать с бактериальными пирогенными эндотоксинами, образуя гель.

       Лизат амебоцитов Limulus (LaL) получают следующим образом. Отбирают иглой кровь краба, помещают ее в буферный раствор. Отделяют центрифугированием амебоциты, являющиеся единственными клетками крови краба, отмывают их гипертоническим раствором натрия хлорида, а затем лизируют, добавляя дистиллированную апирогенную воду. Полученный LaL, хранящийся при +4⁰ С, устойчив в течение 9 месяцев.

       Лимулус-тест проводят, смешивая  в асептических условиях в  пробирке 0,1 мл испытуемого раствора с 0,1 мл LaL. Смесь инкубируют при 37⁰ С в течение от 15 до 90 мин при рН от 6,0 до 8,0, не подвергая ее встряхиванию. При наличии пирогенных эндотоксинов грамотрицательных бактерий образуется гель, который обнаруживается по увеличению вязкости смеси, потере ею текучести. При повороте пробирки на 180⁰ гель не должен разрушаться.

       Лимулус-тест уже в 1980 г. включен  в ХХ фармакопею США наряду  с тестом на кроликах. Его преимуществом  является высокая чувствительность, позволяющая в определенных условиях обнаруживать до 1 нг эндотоксина. Метод в 5 – 10 раз чувствительнее, чем тест на кроликах. Он легко воспроизводится, надежен и экономичен. Тест широко используется для контроля пирогенности воды, требуя для проведения от 20 до 90 мин, хорошо коррелирует с тестом на кроликах. Применение этого метода позволяет очень быстро и своевременно, до использования растворов в клинике, получить результаты анализа на их пирогенность.

       Предложена также новая модификация  лимулус-теста, проводимого в капилляре с применением всего 1 мкл реагента вместо 0,1 мл при пробирочном методе. Для прочтения результата капилляр с реакционной смесью погружается вертикально в окрашенный раствор. Если гель образовался, то раствор не поступает в капилляр, и, наоборот, при отсутствии пирогенов окрашенный раствор заполняет капилляр.