Индикация вирусов при использовании куриных эмбрионов. Вирус лейкоза КРС

Министерство  сельского хозяйства Российской Федерации

ФГБОУ ВПО  «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия имени академика Д.К. Беляева» 
 
 
 
 
 
 

РЕФЕРАТ 

По дисциплине: Вирусология

Тема: «Индикация вирусов при использовании куриных эмбрионов.

             Вирус лейкоза  КРС.» 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

                                                                                                  Выполнил:

                                                                                                  Студент 3 курса

                                                                                                  заочного факультета

                                                                                                  Печь А.С. 

                                                                                                  Проверил:

                                                                                                  _________________ 
 
 
 
 
 
 
 

Иваново

2012

Содержание 
 

1. Индикация вирусов при использовании куриных эмбрионов.
2. Вирус лейкоза КРС
3. Список используемой литературы

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Индикация вирусов при использовании  куриных эмбрионов 

Культивирование вирусов в куриных эмбрионах.

    Большинство известных вирусов обладают способностью размножаться в курином эмбрионе. Используют эмбрионы в возрасте от 8 до 14 дней в зависимости от вида вируса, способа заражения и задач исследования. Вирусы гриппа культивируются в 9-10, осповакцины – в 12, паротита – в 7-дневных куриных эмбрионах. Размножение вируса в куриных эмбрионах происходит в разных частях зародыша, что связано с особенностями тропизма вируса. Методику выращивания вируса в курином эмбрионе широко используют при промышленном культивировании.

                

    Строение  куриного эмбриона и способы его  заражения: 1 – в амнион; 2 – в  аллантоисную полость; 3 – в желточный  мешок 

    Существует  несколько способов заражения развивающегося куриного эмбриона: на хорионаллантоисную оболочку, в аллантоисную и амниотическую полости, желточный мешок, тело эмбриона. 
Заражение на хорионаллантоисную оболочку применяется для выделения и культивирования вирусов, образующих на оболочках бляшки (вирусы вакцины, натуральной оспы, простого герпеса). Перед заражением яйца просвечивают с помощью овоскопа, карандашом очерчивают границу воздушного пространства и хорионаллантоисной оболочки. Поверхность яйца над воздушным пространством и в месте заражения протирают спиртом, прожигают, обрабатывают йодом и делают отверстие в полости воздушного мешка. На месте заражения скорлупу удаляют так, чтобы не повредить подскорлупную оболочку, которую затем прокалывают короткой стерильной иглой, чтобы не повредить хорионаллантоисную оболочку. Воздух из полости воздушного мешка отсасывают. Вирусный материал (0,05 – 0,2 мл) наносят на хорионаллантоисную оболочку туберкулиновым шприцем с короткой иглой или пастеровской пипеткой. Отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом или тем же выпиленным кусочком скорлупы и по краям заливают расплавленным парафином. Зараженные эмбрионы располагают на подставке горизонтально и инкубируют в термостате. Вскрытие эмбрионов производится не раньше 48 часов инкубации. На зараженной оболочке обнаруживаются беловатые непрозрачные пятна разной формы (бляшки).

    Заражение в аллантоисную полость. Вирус, введенный в аллантоис, размножается в эндодермальных клетках, переходя затем в аллантоисную жидкость. Заражение осуществляют следующим способом: в скорлупе над воздушной камерой острием скальпеля или ножниц производят прокол, после чего через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу со шприцем, которая проходит через хорионаллантоисную оболочку и попадает в аллантоисную полость, материал вводится в объеме 0,1 мл и отверстие заливают парафином.

    Заражение в желточный мешок. С этой целью используют эмбрионы 5 – 10-дневного возраста. Наиболее употребительны два метода заражения. По первому материал вводится через воздушное пространство. В центре яйца делают отверстие, помещают его на подставку тупым концом вправо и через отверстие в вертикальном направлении вводят иглу, надетую на шприц, игла проходит через хорионаллантоисную оболочку, аллантоисную полость в желток. В желточный мешок можно ввести от 0,1 до 0,5 мл вируссодержащего материала. После заражения отверстие в скорлупе заливают парафином, и эмбрион помещают в термостат. По второму методу на границе воздушного пространства с той стороны, где лежит желток (стороны, противоположной от эмбриона), делают прокол скорлупы, через который вводят инфекционный материал. Направление иглы должно быть к центру яйца.

    Индикацию вирусов в курином эмбрионе осуществляют на основании специфических поражений  оболочек и тела эмбриона (оспины, кровоизлияния), а также в РГА.  
 
 
 

Вирус лейкоза КРС 

    Лейкоз  крупного рогатого скота  (лат. – Bovine leucosis; англ. – Leukaemia in cattle; гемобластоз, хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы) – хроническая болезнь опухолевой природы, протекающая бессимптомно или характеризующаяся лимфоцитозом и злокачественным разрастанием кроветворных и лимфоидных клеток в различных органах. 

Возбудитель болезни у КРС

      Вирус лейкоза крупного рогатого  скота – РНК-содержащий вирус  подсемейства Oncornavirinae (опухолевые вирусы) семейства Retroviridae. Основным признаком всех представителей семейства Retroviridae является наличие в вирионе обратной транскриптазы. В состав подсемейства Oncornavirinae входят три рода, дифференцируемые на основании морфологии вирионов: вирусы типов С, В и D. Вирусы типа С делят на два подрода: вирусы типа С млекопитающих и вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС).

      ВЛКРС – это экзогенный вирус  в отношении крупного рогатого  скота и других чувствительных  видов животных. Репликация вируса ограничивается клетками лимфоидной популяции и не выявлена в других тканях организма.

      ВЛКРС репродуцируется в перевиваемых, хронически инфицированных культурах  клеток тканей животных разных  видов.

      Установлено, что ВЛКРС чувствителен к температурным воздействиям, разрушается при повторяющихся замораживаниях и оттаиваниях и при прогревании при 56 °С в течение 15 мин. Пастеризация молока (74 °С в течение 16 с) разрушает ВЛКРС. Полная инактивация вируса в молоке или вируссодержащей жидкости (кровь, молозиво) установлена при 50 °С в течение 70 с, при 70…74 °С – за 17 с. Прямой солнечный свет инактивирует ВЛКРС в течение 4 ч, УФ-лучи – в течение 30 мин. Вирус полностью теряет активность в 2%-ных растворах гидроксида натрия и формальдегида и других дезинфектантов в общепринятых концентрациях.

      Таким образом, решающее этиологическое  значение ВЛКРС при возникновении  гемобластозов крупного рогатого  скота доказано. Вместе с тем  при изучении вирусной этиологии  опухолей и лейкозов животных  накапливались достоверные данные о том, что канцерогенный эффект вирусов проявляется в зависимости от иммунобиологического состояния организма и воздействия стресс-факторов. Отмечается также более выраженная генетическая устойчивость отдельных пород и линий животных к ВЛКРС.

      В естественных условиях к  ВЛКРС восприимчив крупный рогатый  скот. Лейкозом болеют молодые  и взрослые животные всех разводимых  пород и помесей, но чаще  эту болезнь отмечают у животных  старше 4 лет. Телята до 6-месячного  возраста устойчивы к ВЛКРС, что обусловлено, вероятно, колостральным иммунитетом. Уровень инфицированное™ животных в возрасте 6…24 мес также низкий.

      Источник возбудителя заболевания  у КРС – больные гемобластозами  животные. В естественных условиях  вирус лейкоза может передаваться пренатально и постнатально. Вирус передается от коровы телятам трансплацентарно во время последних 6 мес внутриутробной жизни. Постнатальная (т.е. горизонтальная) передача включает передачу вируса через молоко или при контакте. В большинстве случаев (более 90%) вирус передается с инфицированными лимфоцитами.

      Основным естественным фактором  передачи ВЛКРС считается молоко  инфицированных и особенно больных  на клинико-гематологических и  опухолевых стадиях коров. Учитывая  возможность переноса ВЛКРС ничтожным  количеством крови, следует иметь в виду, что при несоблюдении правил асептики и антисептики болезнь может распространиться во время проведения ветеринарных и зоотехнических процедур (ятрогенный фактор передачи): ректальные исследования, фиксация за носовые перегородки, бонитировка, массовые вакцинации, взятия крови, проведение хирургических операций и т.п.

      По интенсивности развития эпизоотического  процесса гемобластозы крупного  рогатого скота относятся к медленно развивающимся инфекционным болезням.

      Контагиозность лейкоза незначительна.  Сезонность не проявляется. Природно-географические  и климатические факторы не  влияют на распространение болезни  у КРС.

      У некоторых, чаще всего взрослых  животных, несущих наследственную предрасположенность, при дополнительных молекулярно-биологических и иммунобиологических перестройках в клетке болезнь проявляется гематологическими и реже опухолевыми изменениями в органах кроветворения.

Течение и клиническое  проявление болезни у КРС

      Лейкозы характеризуются длительным  латентным периодом (инкубационный  период), во время которого в  крови выявляют ВЛКРС и антитела  к нему. При спонтанном заражении  этот период длится от 2 до 6 лет.  Клинические проявления зависят  от вовлечения в патологический процесс органов – лимфатических узлов, селезенки, сычуга, сердца, почек, половых и др. Инфекционный процесс при лейкозе развивается медленно и незаметно. В развитии лейкозного процесса у крупного рогатого скота различают четыре стадии: предлейкозную, начальную (доклиническую), развернутую (клинико-гематологическую) и конечную, или терминальную (опухолевую), стадии.

      Предлейкозная стадия у зараженных  ВЛКРС животных проявляется в  виде относительного лимфоцитоза  (до 14 тыс/мкл, или 14 – 109/л) за счет лимфоидных клеток, характерных для подозрительных по заболеванию по «лейкозному ключу». Обнаружить другие патологические изменения не удается.

      Начальная стадия заболевания  КРС характеризуется отсутствием  клинических признаков болезни,  но более постоянными изменениями количественного и качественного состава крови. Число лейкоцитов колеблется от 15 до 40 тыс/мкл, а среди лимфоцитов преобладают юные и средние клетки. Гематологические изменения могут многие годы оставаться стабильными. При этом общее состояние животного – упитанность, молочная продуктивность и воспроизводительная функция не вызывают подозрений на лейкоз. Лишь при обострении хронического течения болезни могут появляться такие признаки, как снижение удоя, истощение и другие, и лейкозный процесс переходит в развернутую стадию.

      Развернутая стадия заболевания  КРС характеризуется кроме гематологических  сдвигов разнообразием специфических  и неспецифических клинических  признаков. У животного ухудшается  общее состояние, отмечаются быстрая утомляемость, плохой аппетит, снижаются удои, прогрессирует истощение, наблюдается атония преджелудков, сменяющаяся диареей. Перкуссией нередко устанавливают увеличение сердца, число пульсовых ударов достигает ПО… 120 в минуту, пульс слабого наполнения, волна малая. Сердечный толчок ослаблен. При сердечной слабости у животного развиваются отеки подкожной клетчатки в области подгрудка и межчелюстного пространства.

      Специфическим клиническим признаком  лейкозов крупного рогатого скота  является прогрессирующее значительное увеличение поверхностных (околоушных, нижнечелюстных, заглоточных, предлопаточных, надвыменных и др.) лимфатических узлов. Отмечается симметричное, но неравномерное увеличение их. Лимфатические узлы достигают величины от 5 до 20 см и более, они безболезненные, подвижные, эластичной или плотной консистенции.

      У молодняка наряду с увеличением  лимфатических узлов в области  голодной ямки, поясницы, шеи часто  отмечают опухолевидные разрастания  зобной железы, обусловливающие  затрудненное дыхание. При значительном увеличении селезенки перкуссией устанавливают притуплённый или тупой звук, в некоторых случаях болезненность. Возможен разрыв селезенки, и животное внезапно погибает вследствие внутреннего кровоизлияния. Значительное увеличение некоторых лимфатических узлов, а также опухолевых разрастаний в тазовой и брюшной областях можно установить при ректальном исследовании. У некоторых (3…5% случаев) больных лейкозами животных отмечают экзофтальм (пучеглазие).