Альтернативные методы исследования в ветеринарной медицине

 

 

Таблица 1. Наиболее распространенные инфекционные заболевания, которые можно диагностировать с помощью имеющихся в продаже иммунодиагностических наборов

Животные  Инфекционное Метод заболевание			Фирма-производитель
Коровы	Респираторный	1	Boots-Celltech (Великобритания)
	синцитиальный вирус
	Инфекционный  ринотрахеит	2	Flow Laboratories (Великобритания)
	Лейкоз		Hoechst (ФРГ)
	Энтерит E.coli	4	Molecular Genetics (США)
Свиньи	Болезнь Ауески	2	Flow Laboratories (Великобритания)
		5	Viral antigens (США)
Лошади	Стронгилоидная  инфекция	5	Cambridge Vet. Sci. (Великобритания)
Собаки	Глисты (Dirafilaria immitis)	6	Allelix (Канада)
	Парвовирус	7	Greenbriar Veterinary Services (США)
	Парвовирус	6	Hoechst (Великобритания)
Кошки	Вирус лейкемии	6	Pitman-Moore (США)
	Инфекционный  перитонит	1	Daryl Lab. (США)
Птицы	Ньюкаслская болезнь		Agritech Sys. (США)
	Инфекционная  болезнь
	синовиальной  сумки
	Ретровирус
	инфекционного бронхита	2	Dynatech Lab. (Великобритания)
	Микоплазмоз
	Пастереллез
	Сальмонеллез
	Вирус ретикулеза

 

Набор Immunocomb предназначен для  диагностики ньюкасл-ской болезни  птиц; в нем используется пластиковая  гребенка с зубцами, на которых адсорбирован антиген. Пробу добавляют в соответствующие  лунки специальной кассеты; в  лунки вставляют и зубцы гребенки. После первичной инкубации гребенку переносят в промывающее устройство и затем в раствор, содержащий конъюгат антииммуноглобулинов с ферментом. После повторной промывки гребенку переносят в раствор субстрата, образующего нерастворимый окрашенный продукт. Такая последовательность: 1 – иммунофлуоресценция; 2 – непрямой ИФА типа ELISA для определения антител; 3 – иммуиодиффузия; 4 – ИФА на дипстиках; 5 – латексная агглютинация; 6 – двухсайтовый ИФА для определения антигена; 7 – гемагглютинация. Операции позволяет одновременно проводить анализ и получать калибровочную кривую. Другим примером усовершенствования набора может служить применение полимерной палочки с иммобилизованными антителами, так – называемого гаммастика. Гаммастик входит в набор Coli-Test 99 EIA, который разработала и выпускает фирма Molecular Genetics Inc. для обнаружения Escherichia coli, являющейся главной причиной воспаления* тонкой кишки у телят. Конструкция гаммастика позволяет увеличивать количество антител, которые можно иммобилизовать на твердой фазе, и отношение площади поверхности реагентов к объему реакционной смеси, а тем самым ускорить анализ. Применение высокоаффинных антител против фимбриального антигена адгезии К99 также способствует ускорению анализа. Гаммастик существенно облегчает постановку анализа одной пробы. Однако в большинстве случаев количество анализируемых проб велико, что ограничивает применимость гаммастика. Напротив, микротитровальные планшеты идеально подходят для выполнения большого числа анализов. Методика выполнения анализа на планшетах традиционна, хотя для измерения результатов анализа в последнее время выпускают более совершенные приборы. Примером может служить прибор CLS Microplate reader, разработанный и выпускаемый фирмой Cambridge Life Sciences pic и представляющий собой очень компактный спектрофотометр. Компактность достигнута, в частности, за счет применения миниатюрных аккумуляторов в качестве источников питания. Такой прибор позволяет осуществлять анализы типа ИФА вне центральной лаборатории и быстрее получать результаты. Эти факторы могут стать решающими при выборе метода мониторинга некоторых инфекционных болезней [17].

6. Определение токсинов и остаточных количеств чужеродных веществ

Большую озабоченность медиков  и широкой общественности вызывают 1) загрязнение пищи анаболическими гормонами, например диэтилстильбэстролом; 2) проникновение в молочные и  мясные продукты антибиотиков, например пенициллина и хлорамфеникола; 3) применение наркотических средств  для стимулирования спортивных результатов  животных, например скаковых лошадей  и борзых собак; 4) загрязнение пищи и кормов микотоксинами. Так как  разрабатываемые в настоящее  время методы скрининга в равной степени применимы для любого из перечисленных выше гаптенов, то в качестве примера ниже детальнее  будут рассмотрены успехи в обнаружении  и определении одного из микотоксинов – афлатоксина.

Дальнейшее развитие иммуноанализа  в ветеринарии, очевидно, будет направлено на сокращение времени анализов и  их упрощение. Эти задачи частично могут  быть решены за счет применения твердых  носителей с развитой поверхностью, обеспечивающих повышение отношения  числа иммунореактивных центров  к объему пробы. Такие твердые  носители, отличающиеся легкостью и  необратимостью иммобилизации и  представляющие собой надежный и  удобный матрикс, могут появиться  в результате более тесного сотрудничества материаловедов и иммунохимиков. Можно ожидать также, что сочетание современных высокочувствительных методов обнаружения с иммуноанализом приведет к созданию иммуносенсорных устройств. Такие иммуносенсоры, которые уже получили высокую оценку в научной литературе, сейчас начинают выпускать в промышленном масштабе. Иммуносенсор должен представлять собой небольшой ручной инструмент, способный после добавления нескольких капель пробы непосредственно показывать количество определяемого вещества в пробе. Создание иммуносенсоров может быть связано с преодолением больших технических трудностей, но кто мог подумать даже 15 лет назад, что за такой короткий срок визуальный иммуноанализ станет обычным в повседневной практике. Очевидно, в будущем будут созданы методики определения новых биологически активных соединений. Одним из наиболее перспективных представляется иммунохимический метод определения специфического белка в сыворотке стельных коров. Специфическая природа молекулы такого белка позволила разработать неконкурентные методы иммуноанализа определения стельности с помощью дипстика [19].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Addie D, Jarrett O. Use of a reverse- transcriptase polymerase chain reaction for monitoring the shedding of feline coronavirus by healthy cats Vet. Rec. 2001, May 26; 148 (21): 6.
2. Herrewegh, A.A., Mahler, M„ Hedrich, H.J., Haagmans, B.L Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R,J, Persistence and evolution of feline coronavirus in a closed cat-breeding colony Virology 1997, Aug 4; 234 (2): 349-363,
3. Comparison of Different Tests to Diagnose Feline Infectious Peritonitis; Katrin Hartmann at al„ 2003.
4. Feline infectious peritonitis; Stacy E, Andrew, Veterinary clinics of North America: small animal; vol. 30, number 5, September 2000.
5. Алехин А.И., Ляпунов И.С, Ляпунов СИ. и др. Термоскрининг // Альманах клинической медицины, 2006; XII: 5.
6. Зеновко Г.И. Термография в хирургии. — М.: Медицина, 1998.
7. Конопацкова О.М. Термографический метод в диагностике опухолей кожи. — Саратов: Изд-во СМУ, 2003.
8. Розенфельд Л.Г., Колотилов Н.Н. Дистанционная инфракрасная термография в онкологии // Онкология, 2001; 3 (2—3): 103—106.
9. Jonez B.F. A reappraisal of the use of infrared thermal image analyzer in medicine. IEEE//Med. Imaging, 1998; 17(6): 1019—1027.
10. Tunley B.V., Henson F.M. Reliability and repeatability of thermographic examination and the normal thermographic image of the thoracolumbar region in the horse // Equine Vet J„ 2004; 36 (4): 306—312.
11. Harper D.L. Thermography in veterinary medicine // Inframation, 2000: 1 (4): 1—6.
12. Куренков, Н.В. Радионуклиды в ядерной медицине [Текст] : справочное издание / Н.В. Куренков, Ю.Н. Шубин ; под общ ред. Н.В. Куренкова. - Обнинск.: ФЭИ, 1998. - 163с.
13. Звонов, И.А. Лучевые нагрузки от радиофармацевтики[Текст] / И.А. Звонов, - М.: Атоминформ, 1999. - 237с.
14. Трофимова, Т.И. Справочник по физике[Текст] : справочное издание / Т.И.Трофимов, - М.: Издательский дом «Дрофа», 2001. -208с.
15. Жданов, В.М. Тайны разделения изотопов[Текст] / В.М. Жданов. - М.: МИФИ, 2004. - 38с.
16. Чазова, Е.И. Неотложные состояния и экстренная медицинская помощь [Текст] : справочное издание / Е.И. Чазова. - М.: Медицина, 1997. - 78с.
17. Воробьёва, А.И. Справочник практического врача [Текст] : справочное издание / А.И.Воробьёв. - М.: Медицина, 2001. - 107с.
18. Яблоков, В.А. Миф о безопасности малых доз радиации [Текст] / В.А. Яблоков // Гражданская инициатива. - 2000. - №1. - С. «23-25.
19. Пат. 2277953 Российская Федерация, МПК A 61 N 5/10, A 61 M 36/00. Элемент с радиоактивным веществом и способ его производства [Текст] / Рэйпач Майкл, Хелл Кевин, Рид Джей. ; заявитель и патентообладатель МЕДИ-ФИЗИКС, ИНК. - 2003112010/14 ; заявл. 01.11.2001 ; опубл. 20.06.2006, Бюл. №17. - 20 с. : ил.